tilbage

BAKTERIER I PÅLÆG

Formål:    

At bestemme antallet af bakterier i pålæg og sammenligne antallet med  vejledende værdier i pålæg. Evt. kan man sammenligne forskellige opbevaringsmetoder for pålægget.

Materialer:

LEVERES: Agar-plader (petriskåle med agar /5 pr. hold), sterilt vand

LEVERES IKKE:  sterile pipetter (0,100 mL, 1 mL og 10 mL ), 7 sterile reagensglas pr. hold, drigalskispatel (eller en L-formet glaspind).

Bestil klassesæt her

Fremgangsmåde: 

Den generelle metode for optælling af bakterier i pålæg er flg.: 

Reagensglas og pipetter steriliseres før forsøget ved opvarmning i ovn ved 150 ^oC i to timer.

 I et reagensglas (kaldet stamopløsningen) ”opløses” 10 g pålæg i 10 mL steriliseret vand. I 6 reagensglas afpipeteres 9 mL steriliseret vand. 

Fra stamopløsningen overføres 1 mL til reagensglas nr. 1 og det rystes. Dvs. at stamopløsningen nu er fortyndet 10 gange. Fra reagensglas nr. 1 overføres 1 mL til reagensglas nr. 2 og det rystes. I reagensglas 2 er stamopløsningen fortyndet 100 gange. Proceduren gentages til og med reagensglas nr. 6.

0,1 mL fra reagensglas nr. 3 overføres til en agarplade og fordeles jævnt ud over pladen med en drigalskispatel og fortyndingsfaktoren skrives på bunden. Det samme gøres med reagensglas nr. 4, 5 og 6.

Den 5. agarplade er kontrol. Herpå fordeles 0,1 mL steriliseret vand.

Agarplader stilles et lunt sted (30°C)  med bunden opad i to døgn (ved lavere temperatur skal agarpladerne stå i længere tid). Pak evt. pladerne ind i folie for at undgå udtørring. Derefter tælles kolonierne.

Resultatbehandling 

Af statistiske årsager skal koloniantallet ligge mellem  25 og 250 for at pladen ”gælder”. Derudover skal man også overbevises om, at bakterietallet falder med fortyndingen. Hvis det ikke sker, kan man regne med, at der er sket fejl undervejs.

Eks.

Man ser at der er færre bakterier med stigende fortynding. Det er altså i orden.

Den eneste plade, der ligger inden for tælleområdet, er den i midten.

 antallet af bakterier pr. g pålæg er:   antal kolonier x fortyndingsfaktoren x 10 

Grunden til, at der multipliceres med 10, er flg.: Der er ”opløst” 10 g pålæg i 10 mL vand, dvs. 1 g pr mL. Nu overføres der 1/10 mL (0,1 mL) til de efterfølgende reagensglas. Derfor faktoren 10.

I ovenstående eksempel er der 2 100 000 bakterier pr. g pålæg.

På  http://www.fi.dk/test/mad/t021/t/testmetode/ kan man finde et acceptabelt niveau for bakterier i pålæg.

Kommentarer

Forsøget kan udvides. Eksempelvis kan man undersøge, hvilken betydning det har for bakterietallet, at pålægget overskrider sidste anvendelsesdato. Eller man kan undersøge, hvad der sker, når pålægget opbevares uden for køleskabet i en madpakke i x antal timer.